新型鈣離子熒光探針Calbryte520, AM

【務必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養(yǎng)級（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性。

產(chǎn)品簡介：

鈣離子檢測在生命科學研究中具有關鍵作用。基于熒光探針與鈣離子結合的光譜響應特性，研究人員可通過熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光光譜和熒光酶標儀等技術精確監(jiān)測細胞內游離鈣離子濃度的動態(tài)變化。自1989年Fluo-3問世以來，后續(xù)開發(fā)的Fluo-4、Fluo-8和Cal-520系列探針雖提升了信背比，但Fluo-4仍存在顯著缺陷：與Fluo-3類似，幾乎所有基于Fluo-4的胞內鈣檢測都必須使用丙磺舒（probenecid）來防止探針外泄，而該抑制劑已被證實會產(chǎn)生復雜的細胞效應，嚴重影響檢測結果。

Calbryte? 520通過革命性突破解決了這一技術難題——其顯著提升的信噪比和優(yōu)化的胞內滯留特性（無需丙磺舒），使其成為目前最可靠的鈣檢測工具。該探針與Fluo-4具有完全一致的激發(fā)/發(fā)射波長，可直接兼容現(xiàn)有Fluo-4檢測系統(tǒng)的所有參數(shù)設置，為研究人員提供了更精準、更便捷的實驗方案。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

1.低背景熒光：與Ca2?結合后顯著增強熒光信號，能有效降低背景干擾，提高檢測靈敏度。

2.多色兼容性：綠色熒光，適用于多通道成像

3.細胞膜通透性： 疏水性AM酯可被動穿透細胞膜，被胞內酯酶水解后形成帶負電荷的熒光染料，實現(xiàn)簡單負載

產(chǎn)品特性：

1）分子量：1090.90

2）溶劑：DMSO

3）解離常數(shù)（Kd，nM）：1200

4）Ex/Em：493/515

保存條件: 

-20℃避光保存

產(chǎn)品使用：

一、儲備溶液的配制

除非另有說明，所有未使用的儲備液應在配制后分裝為單次使用量，并保存于-20°C。避免反復凍融。

Calbryte520, AM 儲備溶液

使用高質量無水DMSO配制2-5 mM的Calbryte520, AM儲備液。請注意，體積僅用于制備儲備溶液。有關適當?shù)膶嶒?span>/生理緩沖液，請參閱樣品實驗方案。

注意：Calbryte520, AM溶于DMSO后為無色透明溶液。

二、工作溶液配制 

Calbryte520, AM 工作溶液

實驗當天，將Calbryte520, AM溶解于DMSO或將儲備液 aliquot 解凍至室溫。

在所選緩沖液（如Hanks和Hepes緩沖液）中加入0.04% Pluronic F-127，配制2-20 μM的Calbryte520, AM工作液。對于多數(shù)細胞系，推薦終濃度為4-5 μM。具體染料加載濃度需根據(jù)實驗條件優(yōu)化。

注意1： 非離子型表面活性劑Pluronic F-127可增強Calbryte520, AM的水溶性。

注意2： 若細胞存在有機陰離子轉運體，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（貨號：NBS2007）（孔板終濃度0.5-1 mM）以減少水解后染料的泄漏。我司提供多種丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（NBS2008-154MG），能降低有機溶劑的使用。

三、實驗操作流程

以下為活細胞加載AM酯的推薦方案，請根據(jù)實際需求調整。

1. 將細胞于生長培養(yǎng)基中孵育過夜。

2. 次日向細胞板中加入1X Calbryte520, AM工作液。

注意：若待測化合物與血清存在干擾，加載前需更換為新鮮HHBS緩沖液。

3. 將加載染料的細胞板置于37°C培養(yǎng)箱孵育1-2小時。

4. 移除工作液，更換為HHBS或含陰離子轉運抑制劑（如1 mM丙磺舒）的緩沖液以清除多余探針。

5. 加入刺激劑后，立即使用配備FITC濾光片的熒光顯微鏡或者具備程序化液體處理系統(tǒng)的熒光酶標儀（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 490/525 nm，截止波長515 nm檢測熒光信號

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。