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<NBS8833> 嘌呤霉素 Puromycin dihydrochloride

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<NBS8833> 嘌呤霉素 Puromycin dihydrochloride

嘌呤霉素 Puromycin dihydrochloride
貨號(hào):NBS8833-25mg;
NBS8833-100mg
品牌:NoninBio
價(jià)格: 675.00~2250.00
分享到:
25mg 100mg

嘌呤霉素

Puromycin dihydrochloride

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS8833-25mg

嘌呤霉素 Puromycin dihydrochloride

25mg

NBS8833-100mg

嘌呤霉素 Puromycin dihydrochloride

100mg

 

產(chǎn)品簡介:

嘌呤霉素(Puromycin),來源于白黑鏈霉菌(Streptomyces alboniger)代謝產(chǎn)物的一種氨基糖苷類抗生素,有效抑制革蘭氏陽性菌生長,對(duì)抗酸桿菌的抑制活性相對(duì)較弱,但對(duì)革蘭氏陰性菌的抑制活性更弱。還能抑制原生生物、藻類、哺乳動(dòng)物和昆蟲細(xì)胞的生長,一般2天內(nèi)能殺死99%的細(xì)胞。作用機(jī)制在于:嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的結(jié)構(gòu)類似物,能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸肽鏈中,導(dǎo)致肽鏈合成的永久終止,進(jìn)而阻止蛋白質(zhì)合成。嘌呤霉素還具有抗腫瘤活性。作為蛋白合成抑制劑,用來研究細(xì)胞分化中控制基因順序表達(dá)和協(xié)同表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。

對(duì)嘌呤霉素的抗性來自嘌呤霉素產(chǎn)生菌內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因,其表達(dá)產(chǎn)物嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(puromycin N-acetyl-transferase)可通過乙酰化嘌呤霉素使其失活。這一特性使得嘌呤霉素常用來篩選和維持培養(yǎng)攜帶pac基因的哺乳動(dòng)物細(xì)胞株,特別是慢病毒感染的細(xì)胞株?,F(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。某些情況下,也能用來篩選攜帶pac基因的大腸桿菌菌株。嘌呤霉素在CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)中也發(fā)揮重要作用。

本品為嘌呤霉素的二鹽酸鹽形式,CAS NO58-58-2,粉末形式,可溶于水配制成50 mg/ml儲(chǔ)存液,0.22μm濾膜過濾除菌后,-20℃凍存。真核細(xì)胞常用的篩選濃度為1-10μg /ml。

 

產(chǎn)品特性

1)化學(xué)名:3'-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3'-deoxy-N, N-dimethyladenosine dihydrochloride

2 同義名:Stylomycin hydrochloride; CL 13900 dihydrochloride; P638 dihydrochloride; CL16536; NSC 3055;

3CAS NO58-58-2

4)分子式:C22H29N7O5·2HCl

5)分子量:544.43 g/mol

6)外觀:白色至灰白色粉末

7)純度:>98% (HPLC)

8)熔點(diǎn):175-177 °C

9)溶解性:溶于水(50mg/ml),乙醇(~1mg/ml),DMSO~10mg/ml),PBSpH 7.2~10mg/ml

 

保存條件

保存:-20℃干燥保存,4年有效。

產(chǎn)品使用:

1、儲(chǔ)存液制備

用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的儲(chǔ)存液,經(jīng)0.22 μm濾膜過濾除菌,按照單次用量分裝,于-20℃凍存,避免反復(fù)凍融。也可溶于甲醇,配制成10 mg/ml的儲(chǔ)存液。

2、建議工作濃度

哺乳動(dòng)物細(xì)胞:1-10 μg/ml,最佳濃度使用宿主細(xì)胞殺滅實(shí)驗(yàn)(殺滅曲線)來確定;

大腸桿菌:LB瓊脂培養(yǎng)基篩選敏感轉(zhuǎn)化菌株,使用濃度為100-125μg/ml。

【注意】:使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌陽性轉(zhuǎn)化子不僅需精確的pH值調(diào)節(jié),而且受宿主細(xì)胞本身狀態(tài)影響。

3、殺滅曲線的建立

嘌呤霉素合適的篩選濃度與細(xì)胞類型、生長狀態(tài)、細(xì)胞密度、代謝情況,以及細(xì)胞所處周期等因素有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株,確定殺死未轉(zhuǎn)染或感染細(xì)胞所需的最低濃度嘌呤霉素至關(guān)重要。建議初次實(shí)驗(yàn)一定要建立殺滅曲線(kill curve),篩選到適合自身實(shí)驗(yàn)體系的最優(yōu)篩選濃度。

1)于24孔板加入500 μl/孔制備好的細(xì)胞懸液,鋪?zhàn)銐虻目滓员WC后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)。37℃細(xì)胞孵育過夜。理想情況開始抗生素篩選時(shí),細(xì)胞達(dá)到較高的密度(~60-80%),常用的細(xì)胞密度如下:

貼壁細(xì)胞:0.8 - 3.0 x 105cells/ml

懸浮細(xì)胞:2.5 - 5.0 x 105cells/ml

2)準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基:含梯度濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基(比如,設(shè)置012,34,56,7,89,10μg/ml,這11個(gè)篩選濃度,每個(gè)濃度2個(gè)復(fù)孔);

3)將孵育過夜的細(xì)胞清洗后,更換新鮮制備的梯度篩選培養(yǎng)基;之后置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育;

4)根據(jù)細(xì)胞的生長狀態(tài),約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基;

5)每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞,觀察存活細(xì)胞率,從而確定抗生素篩選開始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非感染細(xì)胞的抗生素最低濃度,也就是將用到的最優(yōu)篩選濃度。

【注意】:如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞開始變圓但沒有從平板表面脫落可能是以下情況,

a)變圓但是未脫落是細(xì)胞開始死亡的一個(gè)信號(hào),這些需要更長的篩選時(shí)間;

b)若在建議濃度1-10μg/ml范圍內(nèi)還不能完全處死細(xì)胞,此時(shí)需要檢測(cè)藥物是否有效,避免藥物的反復(fù)凍融(<5)。

 

注意事項(xiàng):

1)嘌呤霉素為有毒化合物,操作時(shí)需注意防護(hù),切勿與身體或皮膚直接接觸。

2)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


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