EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑

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產品簡介:

EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑是一款專用于體內的基因轉染試劑，可通過尾靜脈注射的方式將基因傳送至腫瘤部位。與其它體內轉染試劑相比，具有操作簡便、體內毒性低、穩(wěn)定性好、體內循環(huán)時間長、靶向性好等優(yōu)點。

應用范圍:

EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑可適用于眾多動物腫瘤模型。可攜帶熒光標記基因、治療基因等到達腫瘤部位，并在腫瘤部位蓄積和表達。特別適用于各種常規(guī)腫瘤模型如HeLa、B16F10、MCF-7、 MDA-MB-231和A549等，均可得到較高的轉染效率，且重復性好。

保存條件: 

2-8℃保存一年

運輸：

常溫運輸

體內轉染方法:

以體重為20g的荷瘤鼠為例，請參考表1的轉染規(guī)模調整，步驟如下:

*DNA濃度可自行調整，總量等于20μg即可

體內轉染條件的優(yōu)化:

可通過改變腫瘤體積的大小、基因的用量和濃度以及EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑濃度對體內轉染進行優(yōu)化。保證腫瘤體積在50mm³~200mm³最佳，EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑(μL): DNA (μg)可以在2:1和0.5:1之間調整；EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑(μL): siRNA(nmol)可以在10:1和 20:1 之間調整。瘤內基因蓄積建議在注射后24小時檢測，瘤內基因表達建議在注射后48小時檢測。

         表1.  不同體重鼠的體內用量推薦

一：轉染效率低

影響細胞轉染效率的因素有很多。首先，與所轉染細胞有關，有的細胞容易轉染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細胞不易轉染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉染試劑的用量及與DNA的比例有關，在最佳的轉染比例附近可以達到最佳的轉染效果。最后，沒有使用最適宜的細胞密度，應根據各種轉染試劑的說明書中推薦的細胞密度進行細胞接種，更有利于提高轉染效率。

二：轉染效果不穩(wěn)定，不能重現

轉染效果不穩(wěn)定一般與兩個因素緊密相關，一個是轉染試劑的穩(wěn)定性，另一個是基因的穩(wěn)定性。轉染試劑應按照說明書建議的保存溫度及條件進行保存。如使用脂質體類的轉染試劑，則不建議反復凍融，會引起該轉染試劑結構上的變化。基因如短時間內連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長期儲存以降低核酸的降解速度。

三：細胞毒性大

導致轉染時細胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉染試劑的用量過大、轉染時細胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴格按照所選擇轉染試劑的說明書進行操作，以避免細胞毒性大的問題。

四：沒有生成高效率的DNA轉染試劑復合物

沒有生成高效復合物的因素有很多。首先，可能是沒有選對合適的轉染試劑。挑選轉染試劑時應考慮基因的種類及分子量等因素。其次，有的轉染試劑對血清的影響很大，應在無血清情況下進行轉染。使用諾寧生物的EZ poly?  系列轉染試劑無需考慮血清對轉染體系的影響，可在含血清培養(yǎng)基中進行轉染。

五：使用錯誤的轉染操作步驟

無論使用哪一款基因轉染試劑，都應嚴格按照該轉染試劑的說明書進行操作，其中包括轉染試劑的用量、基因用量、最佳轉染比例、孵育時間、檢測時間等重要因素。

六：轉染試劑有時呈云霧狀渾濁

如發(fā)現轉染試劑出現云霧狀渾濁應立即聯(lián)系客服人員。基因轉染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài)，呈云霧狀渾濁可能是由于轉染試劑發(fā)生了污染或儲存溫度太低，請務必按照試劑說明書要求的溫度進行儲存。如出現此現象，建議溫浴10分鐘后，觀察是否澄清。

七：轉染復合物出現沉淀

當轉染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復合物的孵育體系體積小于說明書建議時，由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會導致體系中的復合物出現沉淀。建議要嚴格參考說明書的用量進行轉染。

八：siRNA轉染時，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解？或所使用的細胞是否為難轉染細胞？以及是否按照說明書建議的用量進行了操作等。首先應該選擇合適的siRNA基因轉染試劑，確保細胞密度在60-70%之間，并嚴格按照說明書建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉染時，基因沉默效率不夠高

當細胞同時轉染DNA和siRNA時，建議使用分別轉染的方式進行。即使用基因轉染試劑分別與DNA和siRNA進行復合，再將兩個復合物體系分兩次分別加入到同一個裝有細胞的實驗孔中。因DNA和RNA的轉染機理不相同，如只想使用一種轉染試劑同時轉染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產品，即可以轉染DNA又可以轉染RNA。