樣品分析方案

溶液配制

儲備溶液配制 

iFluor 647 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物儲備液 (200X)

將 500 μL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲備溶液。 注意：重新配制的綴合物溶液可在 2-8 °C 下短期儲存，或在 -20 °C 下長期儲存。

工作溶液配制 

iFluor 647-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物工作溶液 (1X)

將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。
注意：不同細胞系的優化染色濃度可能不同。 活細胞的推薦起始濃度為 5-10 μg/mL。

操作步驟

1.活細胞染色
1.1 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
1.2 添加 100 μL iFluor 647-WGA 工作溶液。
1.3 將細胞與 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分鐘。
1.4 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
1.5 使用 Cy5 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。

2.固定細胞染色
2.1 在PBS中使用4％的甲醛固定細胞。
注意：對于固定細胞膜染色，建議在沒有透化步驟的情況下進行染色。固定后透化步驟會導致細胞內區室染色，如高爾基體和內質網 (ER) 結構染色。
2.2 添加 100 μL iFluor 647-WGA 工作溶液。
2.3 在室溫下用 WGA 工作溶液孵育細胞 10-30 分鐘。
2.4 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
2.5 使用 Cy5 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。

圖示

圖 1. 使用 iFluor 647-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物以 5 μg/mL的濃度在活細胞（Hela細胞） 染色 30 分鐘，然后用 Hoechst 33342 染色。使用帶Cy5和DAPI濾波片組的熒光顯微鏡成像。