5(6) -羧基熒光素琥珀酰亞胺酯

5/6-FAM SE (NHS-Fluorescein, FITC-NHS)

產品簡介：

NHS-Fluorescein（NHS-熒光素，FITC-NHS），別名：5/6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（5/6-carboxyfluorescein succinimidyl ester,5/6-FAM SE），是一種熒光素染料的胺反應性衍生物，具有廣泛的分析應用，可作為抗體和其他探針的標記，用于熒光顯微鏡檢測、流式細胞分析和免疫熒光測定（如Western印跡和ELISA）。

NHS-Fluorescein（NHS-熒光素，FITC-NHS，5/6-FAM SE）通過琥珀酰亞胺酯（NHS酯）官能團活化。與FITC（異硫氰酸熒光素）相比，在生物偶聯上表現出更多優勢。首先，FAM形成的酰胺能更好耐受水解，其次，FAM對偶聯條件的要求更不嚴格且有更好的偶聯效率，生成的偶聯物穩定性更突出。FITC標記的核酸和多肽與對應的FAM標記產物比較，具有更快變質的傾向。據發現，在絕大數的生物應用中都能用FAM試劑來替代FITC試劑。

產品特性：

1）  CAS NO.：117548-22-8

2）  同義名：5(6)-FAM, SE;5(6)-FAM,NHS ester;5(6)-Carboxyfluorescein NHS ester (mixture of isomers), 5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester;5-(and-6)-Carboxyfluorescein, succinimidyl ester;FLUOS; 5 (6)-羧基熒光素N -羥基琥珀酰亞胺酯；NHS-熒光素（5/6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯）,混合異構體；5/6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯；

3）  分子式：C₂₅H₁₅NO₉

4）  分子量：473.39

5）  熒光：λex 492 nm; λem 517 nm in DMF

6）  外觀：粉末

7）  溶解性：溶于DMSO、DMF

8）  純度：≥95%

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，2年有效。 

注意事項：

1.      5/6-FAM SE是5-FAM和6-FAM的異構體混合物，這些異構體的特性在激發和發射光譜方面無法區分。對于蛋白應用，不需要分離特定異構體。

2.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

SE化合物生物標記的幾個考慮因素：

1） 溶劑

大多數情況下，SE化合物（反應性染料）都是疏水性分子，需用無水DMF或DMSO作為溶劑。比如：5/6-FAM SE（Mw：473.39）需先溶于高質量無水DMSO配制成≥1mg/ml的母液，之后加入反應緩沖液中進行標記實驗。強烈推薦新鮮配制母液和工作液，如果非要保存母液的話，請務必根據單次用量分裝，≤-20℃避光密封干燥保存，盡量在1個月內用完。

2） 反應pH

SE與胺的標記反應具非常強的pH依賴性。胺反應化合物與非質子化的脂肪胺反應，包括：蛋白的末端胺，賴氨酸的ε-氨基。氨?；ǔＴ?span>pH 7.5以上進行。通過SE基團的蛋白修飾通常在pH 7.5-8.5之間進行，而異硫氰酸基團需在pH 9.0-10.0之間才能獲得最佳的標記效果。

3） 反應緩沖液

緩沖液含游離胺（比如：Tris、甘氨酸和巰基化合物）必須避免，因為這些也是胺反應試劑。銨鹽（硫酸銨或醋酸銨）普遍用于蛋白沉淀中，必須在進行染料標記之前去除。

比如：5/6-FAM SE進行蛋白標記，可選擇50mM硼酸鈉緩沖液（pH 8.5）作為反應緩沖液。

4） 反應溫度

大部分標記反應在室溫進行，然而，對于某些特殊的標記反應可能需提高或降低溫度。