脂多糖提取試劑盒 Lipopolysaccharide（LPS）Extraction Kit

貨號(hào)：17141 

規(guī)格：100次

品牌：intronbio 

試劑盒組成

LPS背景描述：

 ◆ 脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的主要成分，結(jié)構(gòu)很復(fù)雜、熱穩(wěn)定性*（在250℃下干熱滅菌2h才*滅活）。受LPS發(fā)現(xiàn)的歷史原因，如今LPS的概念幾乎等同于內(nèi)毒素（endotoxin）。LPS由多糖鏈和脂質(zhì)A組成，不同細(xì)菌間的多糖鏈?zhǔn)歉叨茸兓模瑳Q定細(xì)菌的血清型；而脂質(zhì)A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級(jí)聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒性病理生理活動(dòng)，包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致末梢血管虛脫。臨床常通過檢測(cè)LPS的存在來診斷腦膜炎。

◆ 正是LPS與機(jī)體免疫機(jī)能的密切關(guān)系，生命科學(xué)研究常常提取LPS進(jìn)行相關(guān)的研究，如闡明LPS的結(jié)構(gòu)，代謝，免疫學(xué)，生理學(xué)，毒性，生物合成途徑；誘導(dǎo)生長(zhǎng)促進(jìn)因子如白介素的合成與分泌；誘導(dǎo)疾病研究的動(dòng)物模型如炎癥反應(yīng)，急性肺損傷，

產(chǎn)品描述：

◆ 常用的LPS提取方法仍然是Westphal,O. (1965)使用的熱酚-水法（hot phenol-water method），主要優(yōu)勢(shì)在于高產(chǎn)量，但是提取步驟繁瑣，費(fèi)時(shí)，以及常受蛋白質(zhì)和核酸的污染，純度低等缺點(diǎn)也常困擾科研工作者。

◆ iNtRON提供的LPS提取試劑盒是市場(chǎng)上的個(gè)商品化的產(chǎn)品，排除傳統(tǒng)熱酚-水法的缺陷，使得科研工作者能夠快速方便的從細(xì)菌中提取LPS。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

∷ 適用性廣，能從所有G^-菌中提取LPS（見Fig. 2）；

∷ 操作時(shí)間短（包括裂解在內(nèi)，60min內(nèi)即可完成）；操作簡(jiǎn)單方便；

∷ 少量細(xì)菌即可獲得足夠的LPS；LPS產(chǎn)量與細(xì)菌培養(yǎng)物成正比，一般使用3~5ml培養(yǎng)物L(fēng)PS產(chǎn)量高；細(xì)菌適合培養(yǎng)體積1~2ml（OD₆₀₀=0.8-1.2）

∷ LPS產(chǎn)率高，且重復(fù)性好（見Fig.1）；

∷ 提取LPS下游應(yīng)用廣，包括直接用于免疫刺激；

操作步驟：

1）室溫離心收獲細(xì)菌細(xì)胞，13，000rpm，30sec。

2）加入1ml裂解緩沖液（Lysis Buffer），劇烈渦旋混勻。

3）加入200μl氯方，劇烈渦旋混勻10-20 sec，室溫孵育5min。

4）4℃，13,000rpm離心10min，轉(zhuǎn)移400μl上清到新1.5ml離心管中。

5）加入800μl純化裂解液（Purification Buffer），并混勻。-20℃孵育10min。

6）4℃，13,000rpm離心15min。

7）用1ml 70%EtOH洗滌LPS顆粒，并*干燥。

8）在LPS中加入70μl Tris-HCL（10mM，pH8.0），并超聲。

技術(shù)數(shù)據(jù)

LPS提取率

5 使用LPS提取試劑盒從OD600的每個(gè)G（-）菌株中提取LPS后，使用Purpald測(cè)定法對(duì)提取的LPS進(jìn)行定量，結(jié)果證實(shí)了上述提取效率。另一方面，使用我們的 SMART? Micro BCA 檢測(cè)試劑盒觀察到蛋白質(zhì)的存在，并確認(rèn)污染小于 0.2 μg。

從不同菌株中提取的LPS的條帶模式

泳道 1 ： 鼠傷寒沙門氏菌 泳道 2 ： 腸炎
鏈球菌 泳道 3 ： 大腸桿菌 （O055） 泳道 4 ： 大腸桿菌 （O111） 泳道 5 ： 鼠傷寒沙門氏菌 泳道 6 ： 腸炎
鏈球菌 泳道 7 ： 鼠傷寒沙門氏菌 泳道 8 ： 大腸桿菌 （野生tyoe） 泳道 9 ： 大腸桿菌 （O111） 泳道 10 ： 大腸桿菌 （O2）

由于從各種類型的革蘭氏陰性細(xì)菌中提取的LPS的SDS-PAGE后銀染色，根據(jù)作為多聚體存在的LPS的特征和多聚體的數(shù)量，觀察到階梯形式的條帶模式。據(jù)觀察，模式存在差異。

產(chǎn)品檢測(cè)數(shù)據(jù)圖片：

引文列表：