樣品分析方案

溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制 

iFluor 647 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物儲(chǔ)備液 (200X)

將 500 μL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲(chǔ)備溶液。 注意：重新配制的綴合物溶液可在 2-8 °C 下短期儲(chǔ)存，或在 -20 °C 下長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

工作溶液配制 

iFluor 647-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物工作溶液 (1X)

將 5 μL 200X WGA 儲(chǔ)備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。
注意：不同細(xì)胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。 活細(xì)胞的推薦起始濃度為 5-10 μg/mL。

操作步驟

1.活細(xì)胞染色
1.1 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
1.2 添加 100 μL iFluor 647-WGA 工作溶液。
1.3 將細(xì)胞與 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分鐘。
1.4 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
1.5 使用 Cy5 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。

2.固定細(xì)胞染色
2.1 在PBS中使用4％的甲醛固定細(xì)胞。
注意：對(duì)于固定細(xì)胞膜染色，建議在沒(méi)有透化步驟的情況下進(jìn)行染色。固定后透化步驟會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)區(qū)室染色，如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng) (ER) 結(jié)構(gòu)染色。
2.2 添加 100 μL iFluor 647-WGA 工作溶液。
2.3 在室溫下用 WGA 工作溶液孵育細(xì)胞 10-30 分鐘。
2.4 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
2.5 使用 Cy5 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。

圖示

圖 1. 使用 iFluor 647-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物以 5 μg/mL的濃度在活細(xì)胞（Hela細(xì)胞） 染色 30 分鐘，然后用 Hoechst 33342 染色。使用帶Cy5和DAPI濾波片組的熒光顯微鏡成像。