<NBS6510> RIPA Lysis Buffer（Medium） RIPA 裂解液（中）

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RIPA Lysis Buffer（Medium） RIPA 裂解液（中）
貨號：NBS6510
規(guī)格：100ml
品牌：NoninBio

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產品詳細

RIPA Lysis Buffer（Medium）

RIPA 裂解液（中）

RIPA Lysis Buffer（Medium） RIPA 裂解液（中）

貨號：NBS6510

規(guī)格：100ml

品牌：NoninBio

產品簡介：

RIPA裂解液是一種經典的細胞組織快速裂解液，對動物細胞膜、胞漿、胞核成分均有較強的裂解作用，裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。

RIPA裂解液（中）的主要成分為50mM Tris-Hcl（pH7.4），150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS以及Sodium Orthovanadate，Sodium Fluoride，EDTA等。本產品需要和常規(guī)的蛋白酶抑制劑一起使用，以達到更好的提取效果；本產品含有磷酸酶抑制劑，可用于提取磷酸化蛋白。

用RIPA裂解液（中）裂解得到的蛋白樣品，可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用 Bradford 法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

使用說明：

1、使裂解液充分融解，混勻，取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF 的最終濃度為1mM，根據具體實驗需求可選擇加入蛋白酶抑制劑。

2、根據樣品的類型進行如下操作：

對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍（若血清中的蛋白沒有干擾，可不洗）。按照6孔板每孔加入150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

對于懸浮細胞：離心收集細胞，去除培養(yǎng)基，用手指把細胞用力彈散，按照6孔板每孔細胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應無明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。

對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。）使用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

3、樣品充分裂解后，4℃ 10000-14000g離心3-5 分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE、Western blot、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加 150ul 裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200或250ul。

注意：RIPA裂解液（中）的裂解產物中經常會出現透明膠狀物，其主要成分為基因組DNA，當檢測的目標蛋白不與基因組DNA緊密結合，可以直接離心裂解產物，取上清液用于后續(xù)實驗；如果目的蛋白與基因組DNA結合非常緊密，可通過超聲處理打碎打散透明膠紙物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。

注意事項：

1、為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可以適當分裝后使用。

2、需自備PMSF。

3、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。

4、可能需要通過一些預實驗來摸索最佳的適合您實驗條件的裂解液。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

-20℃保存，一年有效。加入蛋白酶抑制劑后建議適量分裝-20℃凍存，避免反復凍融。