DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 細胞膜紅色熒光探針

【溫馨提示】：見我司整理的細胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產品專題 。

產品簡介：

DiI, DiO, DiD和DiR作為一類長鏈的親脂性二烷基碳菁類染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標記細胞膜以及其他脂溶性生物結構。作為一類環境敏感型熒光染料，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質，雖然在水中其熒光強度很弱）結合時，其熒光強度顯著增強。一旦進入細胞后，它們在細胞內質膜中逐步擴散，于最佳濃度條件下可將整個細胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數，偏光依賴性和很短的激發壽命。

四種染料呈現不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標準FITC和TRITC濾光器檢測，可結合使用。DiD可被633 nm氦-氖（He-Ne）激光激發，具有比DiI更長的激發和發射光波長，特別適合用于標記具本底熒光的細胞和組織。而，DiR在體內活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織，并且在紅外光范圍內，其本底熒光水平很低。

本品以DiD的高氯酸鹽形式提供，英文名：1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'

-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate，純度≥95%，適用于熒光檢測研究。

基本特性：

1） 化學名：2-[5-(1,3-Dihydro-3,3-dimethyl-1-octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1,3-pentadien-1-yl]-3,3-dimethyl-1 -octadecyl-3H-indolium perchlorate

2） 同義名：DiD Perchlorate; DiIC18(5); 1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'

-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate;

3） 推薦濾光器：Omega-XF110, XF47, Chroma-41008, 31023

4） 分子式：C61H99ClN2O4

5） 分子量：959.91g/mol

6） 外觀：紫色或深藍色固體

7） 純度：≥95%

8） Ex/Em：644/665 nm（甲醇）

9） 溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

10）化學結構圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，有效期一年。

產品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據具體的實驗條件做出調整。

1. 染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取25mg DiD（Mw：959.91g/mol）溶于5.21ml無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液。

【注意】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融，且要避光保存。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到1～5 μM的工作濃度。

【注意】工作液最終濃度需要根據不同細胞系和實驗體系來優化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區間進行最優濃度的摸索。

2. 懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化以保證得到均一化的標記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長培養液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細胞染色

1）將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。

2）從培養基中移走蓋玻片，濾掉過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的小室內。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化以保證得到均一化的標記結果。

5）吸掉染色工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸走培養基。

4. 顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見下表：

2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；

b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；

c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005；

5.流式細胞儀檢測

經DiO，DiI，DiD和DiR染色的細胞分別用流式細胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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