C11 BODIPY 581/591 脂質過氧化熒光探針

產品簡介：

C11 BODIPY 581/591是一種脂溶性的比率型熒光探針，在模式膜系統和活細胞內用來指示脂質過氧化和抗氧化性能。

C11 BODIPY 581/591具優秀的特征：①發射波長在電磁波譜的可見光區域，非氧化態（591nm）和氧化態（510nm）兩種形式的光譜能夠很好的分開；②具高量子產量，正因如此，使用低標記濃度即可，確保對膜產生最低的干擾，且維持良好的信噪比；③具有良好的光穩定性，產生很低的熒光偽影；④基本上對環境變化比如pH或溶劑極性不敏感；⑤親脂性，輕松進入膜；⑥一旦氧化，探針保持親脂性，且不會自發地離開脂質雙分子層；⑦非氧化態和氧化態定位在脂質雙分子層內兩個不同的區域，一種位于淺層（離雙分子層中心距離為18?），一種位于深層（離雙分子層中心距離為< 7.5?）；⑧高達50μM的濃度對大鼠成纖維細胞無毒性；⑨對各種氧自由基和過氧亞硝酸鹽靈敏，但對超氧化物、一氧化氮、過渡鐵離子和氫過氧化物不靈敏；⑩其對氧化的靈敏度與內源性脂肪酰基團相當。C11 BODIPY 581/591可用來定量鐵死亡。

產品特性：

1）CAS NO.：217075-36-0

2）化學名：(T-4)-difluoro[5-[[5-[(1E,3E)-4-phenyl-1,3-butadien-1-yl]-2H-pyrrol-2-ylidene-κN]methyl]-1H-pyrrole -2-undecanoato(2-)-κN1]-borate(1-), monohydrogen

3）分子式：C30H35BF2N2O2

4）分子量：504.4

5）純度：≥95%

6）激發波長：581nm（還原型），500nm（氧化型）

7）發射波長：591nm（還原型），510nm（氧化型）

8）化學結構圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，2年有效。

產品使用：

1.儲存液制備和保存

將低溫保存的1mg C11 BODIPY 581/591（MW:504.4）置于室溫回溫至少20min，低速離心后加入一定量的無水DMSO配制成適量濃度的母液，比如制備10mM存儲液（往1mg 粉末加入0.1983mL的 DMSO，充分溶解即可）。根據單次用量將儲存液分裝，建議將儲存液-20℃～-80℃避光保存。避免反復凍融。也需注意溶液內濕度的逐漸積累會隨著時間引起探針聚集，從而務必干燥保存儲存液。

2.工作液的制備和保存

在無血清細胞培養中稀釋儲備液,用適當的緩沖液(PBS)或者細胞培養基稀釋10 mM儲存液至工作液濃度。一般推薦使用濃度為2-50uM。(【注】根據不同的實驗目的使用不同的探針濃度，以下的起始操作條件僅作參考，可根據細胞類型和其他的相關因素如細胞或組織的透化等進行適當調整BODIPY C11 581/591工作液的濃度。)

3.細胞染色

3.1 細胞制備：

懸浮細胞：4℃，1000g離心3-5分鐘，棄上清。PBS洗滌2次，每次5分鐘。

貼壁細胞：棄去細胞培養基，加入胰蛋白酶解離細胞，制成單細胞懸液。在 4°C 下以 1000 g 離心 3-5 分鐘，然后棄去上清液。PBS洗2次，每次5分鐘。

3.2  加入1 mL BODIPY 581/591 C11工作液，室溫孵育30分鐘。

3.3  4℃，400 g離心3-4分鐘，棄上清。

3.4  PBS洗滌2次，每次5分鐘。

3.5  用無血清細胞培養基或PBS重懸細胞，熒光顯微鏡或流式細胞儀。

4.應用示例（僅做參考）

4.1.流式檢測法：

為了去除多余的染料，用PBS洗滌細胞兩次以上，之后用胰酶消化，重懸在含5% FBS的PBS中，用流式細胞儀，在488nm-565nm激光器激發，在FL1通道測量505nm-550nm對應的信號，在FL2通道測量580nm以上的信號。當C11 BODIPY 581/591的不飽和丁二烯部分在細胞膜內與活性氧（ROS）發生氧化還原反應，導致其最大發射熒光從591nm紅移至510左右，并且與脂質活性氧的產生成正比。

4.2.共聚焦熒光顯微鏡檢測法：

同樣需要用PBS洗滌細胞兩次以上，利用共聚焦熒光顯微鏡，分別用488nm-565nm激光器激發，收集相關熒光信號圖像，根據測定的熒光信號算數平均值±SEM，用以量化分析脂質過氧化細胞。未氧化的C11 BODIPY 581/591呈現紅色，氧化的呈綠色。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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