一氧化氮（NO）檢測試劑盒（顯色法）

Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit

產品簡介：

一氧化氮（Nitric Oxide, NO）是一種活性基，在許多關鍵生理功能中發(fā)揮重要作用。一氧化氮，一氧化氮合酶（NOS）催化精氨酸的氧化產物，參與宿主防御和發(fā)育、調節(jié)蛋白活化、以及與功能生物分子之間的直接共價相互作用。一氧化氮生成后迅速代謝生成亞硝酸鹽（Nitrite）和硝酸鹽（Nitrate），兩種首要的、穩(wěn)定的和非揮發(fā)性的裂解產物，通過對這兩種產物的測定能間接反映樣本內的一氧化氮水平。

本一氧化氮檢測試劑盒（Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit）利用經(jīng)典的Griess reagent，對亞硝酸鹽進行定量測定。本試劑盒以亞硝酸鈉為標準品，通過優(yōu)化的檢測體系，檢測下限達1μM，且在1~100μM范圍內具有優(yōu)秀的線性關系。本試劑盒不僅能檢測細胞、組織或培養(yǎng)液中的一氧化氮含量，還能檢測血清、血漿或尿液中的一氧化氮含量。

保存條件: 

2-8℃避光保存，至少4個月穩(wěn)定。

產品組成：

產品使用：

【注意】本試劑盒可用于培養(yǎng)液中的一氧化氮測定，培養(yǎng)液內的酚紅和10%血清對測定無明顯干擾。

【注意】本試劑盒可用于血清中的一氧化氮測定。當只需粗略計算，可直接用水稀釋標準品，從而計算出血樣中一氧化氮含量。當需精確計算，如果待測的正常血清是常見血清，能從文獻查閱到一氧化氮濃度，那么用此已經(jīng)一氧化氮濃度的正常血清稀釋標準品，這樣能得到比較精確的一氧化氮濃度。或使用已知濃度的人或其他動物血清來稀釋標準品也可達到目的。或參考文獻進行血清中一氧化氮濃度的測定。

【注意】樣品中存在的一些內在成分可能會干擾測定，導致OD值和靈敏度降低。干擾程度依次順序：尿液>血清>血漿>培養(yǎng)基。

一、需要設備

96孔酶標儀或可見光分光光度計，最佳波長540nm，或在520~560nm下測定，靈敏度可能會降低。

二、準備步驟

2.1實驗前將試劑從冰箱取出回溫至室溫。

2.2 標準品準備：每次測量均新做標準曲線，用待測樣品所用溶液來稀釋標準品，使得濃度在1~100μM內。

比如：當樣品為細胞培養(yǎng)液上清，細胞培養(yǎng)液為DMEM+10% FBS，則用DMEM+10% FBS稀釋標準品。標準品的濃度通常可取0，1，2，5，10，20，40，60，80，100μM。

2.3 樣品準備：a）當樣品為培養(yǎng)液上清，可直接取樣。如果存在沉淀物，則需離心后取上清；b）當樣品為組織或細胞，可快速凍融裂解，然后離心沉淀取上清，體積不足50μl，可用雙蒸水、超純水或0.9% NaCl稀釋（相應的標準品也需用雙蒸水、超純水或0.9% NaCl稀釋）。細胞或組織也可用免疫印跡及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑）來裂解，同樣的，標準品需用裂解液稀釋。

三、測定步驟

3.1取50μl標準品或樣品，加入96孔板內，做好標記；

3.2每孔加入提前回至室溫的50μl Griess reagent I；

3.3 每孔加入提前回至室溫的50μl Griess reagent II；

3.4 室溫避光孵育5min；

3.5 在540nm（或520~560nm）測定吸光度。需在30min內測完，以防褪色降低靈敏度。

3.6 以標準品濃度為橫坐標，吸光度OD值為縱坐標繪制標準曲線，獲得橫縱坐標之間的函數(shù)關系式。之后將樣品OD值代入公式來計算一氧化氮濃度。

注意事項：

1.      本試劑盒內的組分若保存不當發(fā)生顏色變化或沉淀，說明溶液已經(jīng)失效，請勿再用。

2.      當檢測細胞或組織一氧化氮含量，不建議使用RIPA裂解液，因其可能在后續(xù)實驗中產生沉淀，影響測試。建議使用免疫印跡及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑）。

3.      本試劑盒僅測定的是亞硝酸鹽含量，不能檢測硝酸鹽，反映的并非總一氧化氮含量，只能在很大程度上反映一氧化氮的相對量，適合不需要精確定量的實驗。若需要測定總一氧化氮含量，請選擇總一氧化氮檢測試劑盒（顯色法）（貨號：NBS5940），此試劑盒利用硝酸鹽還原酶將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，然后利用Griess reagent測定亞硝酸鹽，進而反映總一氧化氮水平。

4.      本試劑盒對人體有害，請注意適當防護，避免直接接觸人體或吸入體內。

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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